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dc.contributor.advisor1Delgado Cañedo, Andrés-
dc.creatorSantos, Michele Goulart dos-
dc.date.accessioned2019-09-12T13:27:20Z-
dc.date.available2018-12-13-
dc.date.available2019-09-12T13:27:20Z-
dc.date.issued2018-12-06-
dc.identifier.citationSANTOS, Michele Goulart dos. Novo modelo de interação célula epitelial e célula hematopoiética utilizando a linhagem HEK 293 . 2018. 37 f. Trabalho de conclusão de Curso (Curso Ciências Biológicas Bacharelado) - Universidade Federal do Pampa. Campus São Gabriel, São Gabriel, 2018.pt_BR
dc.identifier.urihttp://dspace.unipampa.edu.br:8080/jspui/handle/riu/4548-
dc.description.abstractCell adhesion is fundamental in cells interaction to form different tissues, cellular motility and immune response of living beings. The assembly of these tissues, and their organization into organs, are determined by molecular interactions at cellular level, due to the expression of a large number of adhesion molecules. Cell-cell adhesion models using cell culture, are very important to studying several diseases, such as ischemia, inflammatory diseases and cancer. There are few cellular models of cell adhesion and the most used add Jurkat cells to activated endothelial cells such as HUVEC, CACO-2 or mesenchymal cells. An alternative model for endothelial-hematopoietic cell interaction may be obtained using HEK 293 cells, an endothelial cell line widely used as a tool for recombinant proteins expression. Since increased expression of adhesion cells plays a critical role in the pathogenicity of several diseases, the development of cellular interaction new models with cells easily culturable and able for genetic manipulation become necessary. Thus, this work aimed to establish a new model of study for epithelial cell and hematopoietic cell interaction using the HEK 293 cell line. We tested different HEK 293 concentrations cultured for 24 and 48 hours, in order to obtain the best cell concentration in which the adherent cells did not release from the culture dish in the washes. We also carried out staining tests with different concentrations of rhodamine B and carboxyfluorescein, to establish the best labeling for both cell lines. The cell-cell interaction assay was performed and analyzed by fluorescence microscopy. Results obtained suggested that ideal concentration of HEK 293 cells was 5x104 cells / ml in 24 hours, demonstrating sufficient confluence for remain cells adherence during the well washings. The best labeling for the endothelial line was 40μM rhodamine B consonant with our tests, and for the lymphocytic cell line 500nM of carboxyfluorescein were sufficient. The interaction between cells was achieved at different concentrations, and the distinction between the lines was possible because the dyes had different and non-overlapping emission lengths. Therefore, the dyes choice and their respective concentrations were efficient for this interaction model; however, further studies using at HEK 293 cells will be necessary in order to increase the cell adhesion and to develop a quantitative method to evaluate the interaction in future experiments.pt_BR
dc.languageporpt_BR
dc.publisherUniversidade Federal do Pampapt_BR
dc.rightsAcesso Abertopt_BR
dc.subjectCultura celularpt_BR
dc.subjectInteração célula-célulapt_BR
dc.subjectHEK 293pt_BR
dc.subjectJurkatpt_BR
dc.subjectCell culturept_BR
dc.subjectCell-cell interactionpt_BR
dc.titleNovo modelo de interação célula epitelial e célula hematopoiética utilizando a linhagem HEK 293pt_BR
dc.typeTrabalho de Conclusão de Cursopt_BR
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/6438232190557212pt_BR
dc.contributor.referee1Sassi, Adriana Koslovski-
dc.contributor.referee2D'Avila, Marícia Fantiel-
dc.contributor.referee2Latteshttp://lattes.cnpq.br/7930575466716624pt_BR
dc.contributor.referee1Latteshttp://lattes.cnpq.br/7961143340398459pt_BR
dc.publisher.initialsUNIPAMPApt_BR
dc.publisher.countryBrasilpt_BR
dc.subject.cnpqCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICASpt_BR
dc.description.resumoA adesão celular é fundamental na união de células para a formação de diferentes tecidos, motilidade celular e resposta imunológica dos seres vivos. A composição desses tecidos, e sua organização em órgãos, é determinada por interações moleculares em nível celular, devido à expressão de um grande número de moléculas de adesão. Modelos de adesão célula-célula usando cultivo celular, são de grande importância no estudo de diversas doenças, como isquemias, doenças inflamatórias e câncer. Exemplos de adesão celular mais utilizados são com células Jurkat e células endoteliais ativadas, como as HUVEC, CACO-2 e também células mensequimais. Um modelo alternativo para interação célula endotelial-hematopoiética, pode ser obtido com células HEK 293, uma linhagem endotelial amplamente utilizada como ferramenta de expressão para proteínas recombinantes. Sabendo que a expressão aumentada das moléculas de adesão possui um papel crítico na patogenicidade de diversas doenças, o desenvolvimento de novos modelos de interação celular de fácil cultivo e manipulação genética se faze necessário. Por essa razão, este trabalho buscou estabelecer um novo modelo de estudo para interação célula epitelial e célula hematopoiética, utilizando a linhagem de células HEK 293. Foram testados diferentes concentrações de células HEK 293 cultivadas durante 24 e 48 horas com a finalidade de obter a melhor concentração celular para a manutenção das células aderentes na placa. Foi desenvolvido também testes de coloração com os corantes rodamina B e carboxifluoresceína em diferentes concentrações, no intuito de se estabelecer a melhor marcação para ambas as linhagens. O ensaio de interação célula-célula foi então realizado e analisado por meio de microscopia de fluorescência. Os resultados obtidos sugeriram que a concentração ideal de células HEK 293 foi a de 5x104 células/ml em 24 horas, demonstrando ser uma confluência suficiente para que as células permanecessem aderidas durante as lavagens dos poços. Quanto às marcações, foi estabelecido que para a linhagem endotelial a melhor marcação foi com 40µM de rodamina B, e para a linhagem linfocítica a marcação suficiente foi a de 500nM do corante carboxifluoresceína. A interação entre as células foi alcançada nas diferentes concentrações, e a distinção entre as linhagens foi possível devido aos corantes possuírem comprimento de emissão da luz diferentes e não sobrepostos. Portanto a escolha dos corantes e suas respectivas concentrações, foram eficientes para esse modelo de interação; contudo, outros estudos voltados para as células HEK 293 se fazem necessários, com o propósito de aumentar essa aderência celular, além de desenvolver um método quantitativo para avaliar a interação em futuros experimentos.pt_BR
dc.publisher.departmentCampus São Gabrielpt_BR
???org.dspace.app.webui.jsptag.ItemTag.appears???Ciências Biológicas - Bacharelado

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