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Tipo: Trabalho de Conclusão de Curso
metadata.dc.title: Estabelecimento de um protocolo para detecção de Nosema apis e Nosema ceranae a partir de amostras de mel
metadata.dc.title.alternative: Establishment of a protocol for detection of Nosema apis and Nosema ceranae in honey samples
Autor(es): Tresbach, Rafael Hencke
Primeiro Orientador: Boldo, Juliano Tomazzoni
Resumo: As abelhas são a principal espécie responsável pela polinização e propagação de espécies vegetais. Além da polinização, produtos úteis aos seres humanos como mel, apitoxina, cera, geleia real e própolis são fornecidos pelas abelhas. Entretanto, patologias como a nosemose, que é uma das responsáveis pelo Distúrbio de Colapso de Colônias, podem levar a perdas de colmeias e declínio de produção e, consequentemente, perdas econômicas. O presente trabalho objetiva padronizar um método para a detecção dos microsporídios Nosema apis e Nosema ceranae em amostras de mel, visando fornecer uma alternativa rápida e confiável aos atuais métodos e utilizando o produto mais abundante da colmeia. Para este trabalho, utilizaram-se três protocolos de extração de DNA de forma a compará-los, sendo um protocolo com o uso de micro-ondas e outros dois com kits comerciais, sendo um para extração de DNA genômico de células animais e bacterianas e outro para extração de DNA genômico vegetal. Avaliamos 15 amostras de mel do estado do Rio Grande do Sul coletadas entre 2007 e 2008 e que foram consideradas positivas para presença de esporos de Nosema spp. por microscopia óptica, porém sem determinação de espécie.Dos três métodos que foram analisados neste trabalho, apenas o método utilizando o kit de extração de DNA genômico de plantas permitiu a amplificação de produtos dos tamanhos esperados. Das 15 amostras utilizadas, 14 mostraram amplificação para N. apis e 11 revelaram presença de N. ceranae. Com estes resultados, pudemos padronizar um método para identificação precoce das espécies de Nosema presentes em amostras de mel. O protocolo se mostrou rápido e eficiente e capaz de extrair DNA genômico de qualidade a partir de amostras de mel para identificação de N. apis e N. ceranae utilizando PCR.
Abstract: Honey bee (Apis mellifera) is the main species responsible by pollination and vegetable propagation. Aside pollination, several products used by human beings, i. e. honey, apitoxin, wax, royal jelly and propolis are provided by honey bees. However, pathologies like nosemosis, which is one of the main causes of Colony Collapse Disorder, may be responsible for severe colony losses and overall production decline, leading to economic losses. This work aims to standardize a technique for detection of Nosema apis and Nosema ceranae in honey samples, providing a fast and reliable alternative for the current methods, using as sample the most abundant product of honey bees. For this work, three DNA extraction protocols were tested and compared. One protocol used a microwave to disrupt and further extract DNA from cells and two other protocols used commercial kits: a kit for genomic DNA extraction from animal tissue and bacteria cell samples and a kit for plant genomic DNA extraction. Fifteen honey samples collected in Rio Grande do Sul State in 2007 and 2008 were tested. Nosema spp. spores were previously detected using optic microscopy in the samples, but no species were reliably determined. Considering the three tested methods, only the method using the plant genomic DNA extraction kit presented was able to obtain the expected PCR products. Fourteen out of the 15 honey samples tested were positive for N. apis and 11 out of the 15 samples were positive for N. ceranae. Standardization of a technique for early detection of Nosema species in honey samples was possible. The developed protocol proved to be fast and efficient, allowing extraction of genomic DNA in appropriate quality from honey samples and suitable for N. apis and N. ceranae detection.
metadata.dc.subject: Nosema apis
Nosema ceranae
Mel
Apis mellifera
Detecção por PCR
Honey
Polymerase Chain Reaction
CNPQ: CNPQ::CIENCIAS AGRARIAS
metadata.dc.publisher: Universidade Federal do Pampa
Campus: Campus São Gabriel
Tipo de acesso: Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil
Licença: http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/
metadata.dc.identifier.uri: http://hdl.handle.net/riu/642
metadata.dc.date.issued: 22-Aug-2014
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