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metadata.dc.type: Dissertação
Title: Gonadotrofina coriônica equina (ECG) na superestimulação ovariana prévia a opu em vacas braford: efeito sobre o crescimento folicular e na cinética de fecundação e desenvolvimento embrionário in vitro
Other Titles: Doses of equine chorionic gonadotropin (ECG) in ovarian supertimulation prior to opu in braford cows: effect on follicular growth and fertilization potential and embryo development in vitro
metadata.dc.creator: Ribas, Bibiana Noal
metadata.dc.contributor.advisor1: Leivas, Fábio Gallas
metadata.dc.contributor.advisor-co1: Brum, Daniela dos Santos
metadata.dc.description.resumo: Devido à grande necessidade em aumentar o material genético nos bovinos, as técnicas OPU/PIV vêm sendo aplicadas em larga escala com a finalidade de se obter um maior número de produtos nascidos por ano de fêmeas selecionadas. No entanto, alguns animais apresentam um baixo número de folículos disponíveis para a OPU, enquanto outros apresentam uma baixa taxa de conversão de oócitos em embriões. Neste contexto trabalhos que busquem maximizar os resultados de OPU/PIV são essenciais. Uma das alternativas é manipular farmacologicamente o desenvolvimento folicular para obter oócitos mais competentes para a fecundação in vitro e desenvolvimento embrionário. Por isso, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de diferentes doses de gonadotrofina coriônica equina (eCG) em um protocolo prévio à OPU, sobre o desenvolvimento folicular, número e qualidade dos oócitos recuperados assim como potencial de fecundação e desenvolvimento embrionário in vitro. Dezesseis vacas doadoras Braford foram submetidas a 4 sessões de OPU com intervalo de 15 dias entre cada aspiração (n=16 por tratamento; cross over), para avaliar o efeito da dose de eCG as doadoras foram dividas de acordo com os respectivos tratamentos (Controle = zero, eCG200 = 200UI de eCG, eCG400 = 400UI de eCG e eCG800 = 800UI de eCG). No início do protocolo de sincronização (D0), as doadoras receberam 2 mg de benzoato de estradiol IM, 12,5 mg de dinoprost trometamina IM e um dispositivo de liberação lenta de P4 intravaginal. No dia 3, as doadoras receberam uma dose de eCG de acordo com cada tratamento e no dia 6, o dispositivo de P4 foi removido e as doadoras submetidas a OPU. Antes da OPU, os vii folículos ovarianos foram visualizados, mensurados e classificados de acordo com o diâmetro em pequenos (<6mm), médios (6-10mm) e grandes (>10mm). Após a OPU, os oócitos viáveis de cada vaca foram levados a MIV e FIV em grupos de acordo com os tratamentos. A MIV foi realizada durante 24h à 39°C em TCM 199 modificado. Para a fecundação in vitro, os espermatozoides de um touro Bos taurus de fertilidade comprovada foram selecionados por gradientes de Percoll e co-incubados com os oócitos por 18h. Após a FIV, 50% dos prováveis zigotos foram avaliados quanto à taxa de fecundação por epifluorescência. O restante dos oócitos foram transferidos para gotas de SOFaaci e cultivados in vitro para avaliação da taxa de clivagem, momento da primeira clivagem e número de células às 48 horas em um sistema de monitoramento embrionário. As análises estatísticas foram realizadas com ANOVA e as médias comparadas pelo teste de Tukey (P<0,05). Não houve diferença no número de folículos, quantidade e qualidade morfológica dos oócitos obtidos entre os tratamentos (P <0,05). A taxa de recuperação de oócitos foi semelhante entre os grupos tratados com eCG, porém, inferior ao grupo Controle (p<0,0001). No entanto, o grupo eCG800 apresentou maior número de folículos médios e grandes (>6mm e >10mm; P <0,00001). Adicionalmente o grupo eCG800 apresentou maior taxa de fecundação normal (54,3±8,5) e menor taxa de polispermia (5.7±4.0) que os demais grupos (P < 0,05). Os grupos eCG800 e Controle tiveram maior taxa de clivagem que os demais tratamentos, 68,6±7,9 e 75,6±6,8, respectivamente. Não houve diferença no momento da primeira clivagem e no número médio de células às 48 h entre os tratamentos. Com base nestes dados, pode-se concluir que a dose de 800UI de eCG aumentou a proporção de folículos >6mm, proporcionando a maior taxa de fecundação normal e uma redução na taxa de polispermia em relação ao Controle e as demais doses de eCG, sem prejuízos a cinética de desenvolvimento embrionário até 48 horas.
Abstract: Due to the great need to increase the genetic material in cattle, the OPU / PIV techniques have been applied in a large scale in order to obtain a larger number of products born per year of selected females. However, some animals have a low number of follicles available for OPU, while others have a low rate of oocyte conversion in embryos. In this context, works that seek to maximize OPU / PIV results are essential. One of the alternatives is to pharmacologically manipulate follicular development to obtain more competent oocytes for in vitro fertilization and embryonic development. Therefore, the objective of this study was to evaluate the effect of different doses of equine Chorionic Gonadotrophin (eCG) on a protocol prior to OPU, on the follicular development, number and quality of oocytes recovered as well as potential for fertilization and in vitro embryo development. Sixteen Braford donor cows were submitted to 4 OPU sessions with a 15 day interval between each aspiration (n = 16 per treatment, cross over), to evaluate the effect of the eCG dose the donors were divided according to the respective treatments (Control = zero, eCG200 = 200UI of eCG, eCG400 = 400UI of eCG, and eCG800 = 800UI of eCG). At the beginning of the synchronization protocol (D0), the donors received 2 mg of estradiol IM benzoate, 12.5 mg of dinoprost tromethamine IM and a slow intravaginal P4 release device. On day 3, the donors were given a dose of eCG according to each treatment and on day 6, the P4 device was removed and the donors were subjected to OPU. Before OPU, ovarian follicles were visualized, measured and classified according to the diameter in small (< 6 mm), medium (6-10 mm) and large (> 10 mm). After OPU, viable ix oocytes from each cow were taken to IVM and IVF in groups according to treatments. IVM was performed for 24 hours at 39°C in modified TCM 199. For in vitro fertilization, the sperm of a Bos taurus bull of proven fertility were selected by Percoll gradients and co-incubated with the oocytes for 18 h. After IVF, 50% of probable zygotes were evaluated for fertilization rate by epifluorescence. The remaining oocytes were transferred to drops of SOFaaci and cultured in vitro for evaluation of the cleavage rate, time of the first cleavage and cell number at 48 hours in an embryonic monitoring system. Statistical analyzes were performed using ANOVA and the means were compared by the Tukey test (P < 0.05). There was no difference in the number of follicles, quantity and morphological quality of the oocytes obtained between the treatments (P < 0.05). The oocyte recovery rate was similar between the eCG treated groups, but lower than the Control (p < 0.001). However, the eCG800 had a greater number of medium and large follicles (> 6 mm and > 10 mm, P <0.00001). In addition, the eCG800 had a higher normal fertilization rate (54.3 ± 8.5) and a lower rate of polyspermy (5.7 ± 4.0) than the other groups (P < 0.05). The eCG800 and Control had a higher cleavage rate than the other treatments (68.6 ± 7.9 and 75.6 ± 6.8), respectively. There was no difference at the time of the first cleavage and in the average number of cells at 48 h between treatments. Based on these data, it can be concluded that the dose of 800UI of eCG increased the proportion of follicles > 6mm, providing the highest rate of normal fertilization and a reduction in the rate of polyspermia in relation to Control and the other doses of eCG, without impairing the kinetics of embryonic development until at 48 hours.
Keywords: Bovine
Stimulation
Bovino
Superestimulação
eCG
OPU/PIV
metadata.dc.subject.cnpq: CNPQ::CIENCIAS AGRARIAS
metadata.dc.language: por
metadata.dc.publisher.country: Brasil
Publisher: Universidade Federal do Pampa
metadata.dc.publisher.initials: UNIPAMPA
metadata.dc.publisher.department: Campus Uruguaiana
metadata.dc.publisher.program: Mestrado Acadêmico em Ciência Animal
Citation: RIBAS, Bibiana Noal. Gonadotrofina coriônica equina (ECG) na superestimulação ovariana prévia a OPU em vacas braford: efeito sobre o crescimento folicular e na cinética de fecundação e desenvolvimento embrionário in vitro. 66 p. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal) – Universidade Federal do Pampa, Campus Uruguaiana, Uruguaiana, 2017
metadata.dc.rights: Acesso Aberto
URI: http://dspace.unipampa.edu.br:8080/jspui/handle/riu/3380
Issue Date: 8-Dec-2017
Appears in Collections:Mestrado e Doutorado em Ciência Animal

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